CRISPR是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在该机制中Cas蛋白含有两个核酸酶结构域,可以分别切割两条DNA链。crRNA(CRISPR RNA)和tracrRNA结合形成复合物。Cas蛋白中的核酸酶即可对与复合物结合的DNA进行切割。切割后DNA双链断裂从而使入侵的外源DNA降解。gRNA识别并结合在目标基因区域引导Cas9蛋白对结合位点进行切割,引起DNA双链断裂(DSB),触发细胞自身的非同源末端修复机制(NHEJ),NHEJ修复的过程中往往会产生DNA的插入或删除(Indel),造成移码突变,致使基因功能丧失,从而实现基因敲除。
&您需要提供
1 需要敲除的基因序列号
2 细胞名称或者细胞
3 培养条件
&我们的服务
1 载体构建:靶点设计、载体构建和病毒包装
2 细胞预实验:确定sgRNA-Cas9导入的方法,进行药物浓度筛选并观察细胞是否能够形成单克隆培养
3 正式实验:内源性活性筛选、单克隆细胞筛选、测序鉴定
&您将得到
1 sgRNA序列
2 sgRNA-Cas9基因敲除质粒以及鉴定结果
3 基因敲除单克隆细胞系
4 完整实验报告及相关原始数据(包括电泳检测图片、转染效率检测图片)